【产品名称】：积雪草提取物Hydrocotyle asiatica extract

　　【CAS】：84696-21-9

　　【EINECS】：283-640-5

　　【使用部位】：双子叶植物伞形科Umbelliferae积雪草Centella asiatica(L.)Urban的干燥全草或带根全草

　　【原料描述】：本品为伞形科植物积雪草的干燥全草。夏、秋二季采收，除泥沙，晒干。本品常卷缩成团状。根圆柱形，长2〜4cm,直径1〜1.5mm表面浅黄色或灰黄色。茎细长弯曲，黄棕色，有细纵皱纹，节上常着生须根。叶片多皱缩、破碎，完整者展平后呈近圆形或肾形，直径1〜4cm；灰绿色边缘有粗钝齿；叶柄长3〜6cm，扭曲。伞形花序腋生，短小。双悬果圆形，有明显隆起的纵棱及细网纹，果梗甚短，气微，味淡。本品按干燥品计算，含积雪草苷（C48H78O19)和羟基积雪草苷（C48H78O20）的总量得少于0.80%。

 

 

　　【原料产地】：陕西、安徽、广西、四川

　　【有效成分研究】：

　　1.三萜类

　　积雪草全草主要含多种三萜类成分，其中有积雪草苷（asiaticoside,C48H78O19,M:959.15,mp:235-238c,药理活性成分、质量标志成分）、羟基积雪草苷（madecassoside,C48H79O20,mp:220-223c）、玻热模甙（brahmoside）、玻热米甙（brahminoside）、参枯尼甙（thankuniside）、异参枯尼甙（isothankunside）和斯理兰卡积雪草甙（centelloside）[2]，积雪草二糖苷(asiaticodiglycoside,mp.225-227C)[3]等，均为五环三萜皂甙，最近报导[4]，发现新的三萜类成分，积雪草皂苷B,积雪草皂苷C,积雪草皂苷D。积雪草中还有多种游离的三萜酸:积雪草酸（asiatic acid,C30H48O5;mp:242-244C）、羟基积雪草酸（brahmic acid or madecassic acid,mp:265-268c）、异参枯尼酸（isothankunic acid）和Ternomilic acid[2]马达积雪草酸(madasiatic acid),centic acid,centoie acid,cenellic acid,indocentic acid[3],6-羟基积雪草酸(6-B-OH-hydroxyasiatic acid)[5]等。

　　2.多炔烯烃类

　　积雪草中还含有多炔烯烃类成分,如:C16H21O2,C19H27O4,C19H27O3，C15H20O2[3]，C19H28O2，C17H24O3[6]和11-oxoheneicosanyl-cyclohexane和dotriacont-8-en-1-oic acid,3-isoocladecanyl-4-hydroxy-a-pyrone[7],3-o-[a-L-arabinopyranosyl]-2a,3a,6a,23a-tetrhydroxyurs-12-ene-28-oic acid[3]等。

　　3.挥发油类

　　秦氏等[8]从积雪草中鉴定了45个长链的挥发油类成分。其中含量较高的有石竹烯(caryophyllene)，法尼烯(farnesol)，榄香烯(elemene),长叶烯(longifolene)等。

　　4.其他成分

　　除上述化学成分外积雪草中还含有其他成分,Srivastava R[9]在积雪草中分离得到Stigmasterol,Stigmasterone和Stigmasteroi-B-glucopyranoside。谷氨酸和天冬氨酸,Vit B1的存在。Holeman等人[10]分离得到了倍半萜类成分。何氏等人[11]分离得到了胡萝卜甙(dauco sterol)香草酸(vanfllic acid)。另外还发现含有内消旋肌醇、积雪草糖、胡萝卜烃类、叶绿素、山奈酚、ß-谷甾醇、生物碱以及鞣质等成分。

　　【产品规格】：积雪草总甙70%

 

 

　　【工艺流程】：

 

　　【检测方法】：

　　一：行业标准检测方法

　　流动相：乙腈：甲醇：水=26：24：50

　　波长：204nm

　　灵敏度：0.5AUFS

　　流速：0.8ml/min

　　色谱柱：Fuji Silysia C18 5um 4.6mm×250mm

　　对照品制备：精密称取羟基积雪草甙对照品、积雪草甙对照品各15mg于25m容量瓶中，色谱纯甲醇溶解并定容至刻度。

　　样品制备：精密称取样品20mg于25ml容量瓶中，色谱纯甲醇溶解并定容至刻度。

　　二：药典检测方法

　　色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-2 mmol/L倍他环糊精溶液（24:76)为流动相；检测波长为205nm。理论板数按积雪草苷峰计算应不低于4000。

　　对照品溶液的制备：取羟基积雪草苷对照品和积雪草苷对照品适量，精密称定，加甲酵制成每lml各含0.2 mg的溶液，即得。

　　供试品溶液的制备：取本品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1，注入液相色谱仪，测定，即得。

　　本品按干燥品计算，含总苷以羟基积雪草苷（C48H78O20）和积雪草苷（C48H78O19)的总量计,不得少于55.0%。

　　三：商务部检测方法

　　A.2.1试剂

　　A.2.1.1乙腈（色谱纯）。

　　A.2.1.2甲醇。

　　A.2.1.3磷酸。

　　A.2.1.4β环糊精。

　　A.2.1.52 mmol/Lβ环糊精（pH=4）：称取2.27 gβ环糊精，加水1000 mL超声溶解，用磷酸调节pH至4（约加磷酸0.1 mL），超声混匀，过0.45μm水系滤膜。

　　A.2.2对照品

　　积雪草苷对照品单体。积雪草提取物定性对照品（供总苷含量测定时定性用，含羟基积雪草苷、积雪草苷、羟基积雪草酸、积雪草酸4种成分）

　　A.2.3仪器和用具

　　A.2.3.1高效液相色谱仪（紫外检测器或二极管阵列检测器）

　　A.2.3.2分析天平：感量0.01mg。

　　A.2.3.3超声波清洗器。

　　A.2.3.4针筒式过滤器，0.45μm微孔滤膜，有机系。

　　A.2.4色谱条件

　　A.2.4.1色谱柱：Luna C18，250 mm×4.6 mm，5μm。

　　A.2.4.2流动相

　　a）流动相A：2 mmol/Lβ环糊精（pH=4）（A.2.1.6）b）流动相B：乙腈

　　A.2.4.3梯度条件：见表A1

 

　　A.2.5操作步骤

　　A.2.5.1积雪草苷对照品溶液的制备：精密称取积雪草苷适量，用甲醇超声溶解，配制成浓度约为0.6 mg/mL的标准使用溶液，过0.45μm有机滤膜，备用。

　　A.2.5.2定性对照品溶液的制备：精密称取积雪草提取物定性对照品适量，用甲醇超声溶解，定容，过0.45μm有机滤膜，备用。

　　A.2.5.3样品溶液的制备：精密称取积雪草提取物（约含积雪草苷10%）150 mg，置25 mL容量瓶中，甲醇超声溶解，冷却至室温，甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm有机滤膜，待测。

　　A.2.5.4依次注射空白溶液、对照品溶液、定性对照品溶液、样品溶液进行检测，外标法定量。

　　积雪草苷对照品液相色谱图

 

 

　　参考文献

　　[1] 陈瑶，秦路平，郑汉臣，张朝晖.积雪草的资源分布与生药学研究.中国中药杂志，2000，25（1）：199～201

　　[2] 赵宇新，李曼玲，冯伟红，康琛，范莉。积雪草的研究进展.中国中医药信息杂志，2002,(8)9,8,81~85

　　[3] 张雷磊,王海生,姚庆强,刘拥军，栾阳,王秀丽.积雪草化学成分研究.中草药.2005,36(12):1761

　　[4] 余传隆,黄泰康,丁志遵,等。中药辞海，中国医药科技出版社,1993,12..2114.

　　[5] Shukla YN,Srivas tava Ritu,Tripathi AK,et al.Charicterization of an Ursane triterpenoid from Centella asiatica with growth inhibitory activity against Spilarictia oblique Pharm Biol.(Lisse Neth),2000,38(4):262.

　　[6] 斯里兰卡积雪草中的熊果烷型和齐墩果烷型三萜寡糖苷[英],Matsuda H…//Cherh Pharm Bull-2001,49(10):1368

　　[7] Srivastava Ritu,Shukla YN.A disubstituted pyrone from Centella Asiatica.Indian Chen,Sect B:Org Chem Incl Med Chem,1997.36B(10):963

　　[8] 秦路平，丁如贤，张卫路,等,积雪草挥发油类成分分析及其抗抑郁作用研究，第二军医大学学报,1998,19(2):186

　　[9] Srivastava Ritu,Shukal YN,Tripathi AK.Antifeedant compounds from Centella asiatica.Fitoterapia,1997,68(1):93

　　[10] Holeman M,Theron E,Pinel R.Centella asiatica:Analysis by GC-MS and IRMS.Cosmet Aromes,1994,120,52