【产品名称】：桑叶提取物Mulberry Leaf Extract

　　【产品别名】：铁扇子桑叶提取物桑叶多糖桑叶黄酮桑叶DNJ脱氧野尻霉素

　　【英文名称】：Mulberry Leaf Extract

　　【使用部位】：桑科植物桑Morus alba L.的叶

　　【主要成分】：黄酮、生物碱、多糖等多种活性物质

　　【植物来源】：桑叶，落叶乔木，高3～7米或更高，通常灌木状，植物体含乳液。树皮黄褐色，枝灰白色或灰黄色，细长疏生，嫩时稍有柔毛。叶互生;卵形或椭圆形，长5～10厘米，最长可达20厘米，宽5～11厘米，先端锐尖，基部心脏形或不对称，边缘有不整齐的粗锯齿或圆齿;叶柄长1.5～4厘米；托叶披针形，早落。花单性，雄雌异株；花黄绿色，与叶同时开放；雄花成柔荑花序;雌花成穗状花序；萼片4裂；雄花有雄蕊4：雌花无花柱，柱头2裂，向外卷。聚合果腋生，肉质，有柄，椭圆形，长1～2.5厘米，深紫色或黑色，少有白色的。花期4～5月。果期6～7月。全国各地有栽培。以江苏、浙江一带为多。本信息是由Chemicalbook的贾杰编辑整理。

　　【成分性质】：叶含芸香甙槲皮素、异槲皮甙、槲皮素-3-三葡萄糖甙、微量的β-谷甾醇β-D-葡糖甙、蛇麻脂醇、内消旋肌醇、昆虫变态激素牛膝甾酮和蜕皮甾酮、溶血素、绿原酸。挥发油成分中有乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸、水杨酸甲酯、愈创木酚、酚、邻苯甲酚、间苯甲酚、丁香油酚等。又含草酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、棕榈酸、棕榈酸乙酯、三十一烷、羟基香豆精、蔗糖、果糖、葡萄糖、天门冬氨基酸和各氨酸等氨基酸。并含维生素C、谷胱甘肽、叶酸、5-甲酰四氢叶酸、维生素B1、维生素B2、腺嘌呤、胆碱、胡芦巴碱，以及铜、锌、硼、锰等。

　　槲皮素：分子式C15H10O7，分子量302.25，mp 316℃。含水物分子式C15H9O7·2H2O，黄色结晶，mp 313℃～314℃(分解)。溶于热乙醇(1：23)、冷乙醇(1：300)，可溶于甲醇、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几乎不溶于水。

　　【存储条件】：避光储存于密封容器中

　　【原料采购标准】：

 

项目	指标
性状	本品多皱缩、破碎。完整者有柄，叶片展平后呈卵形或宽卵形，长8〜15cm，宽7〜13cm。先端渐尖，基部截形、圆形或心形，边缘有锯齿或钝锯齿，有的不规则分裂。上表面黄绿色或浅黄棕色，有的有小疣状突起；下表面颜色稍浅，叶脉突出，小脉网状，脉上被疏毛，脉基具簇毛。质脆。气微，味淡、微苦涩。
鉴别	薄层色谱在与对照桑叶药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。
水分%	≤15.0（CP2015通则0832第二法）
总灰分%	≤13.0（CP2015通则2302）
酸不溶性灰分%	≤4.5（CP2015通则2302）
浸出物%	照醇溶性浸出物测定法（CP2015通则2201)项下的热浸法测定，用无水乙醇作溶剂≥5.0
芦丁%	照高效液相色谱法(CP2015通则0512)测定本品按干燥品计算，含葛根素≥0.1%

 

　　【产品规格】：

　　桑叶多糖

 

桑叶多糖 规格单
项目	标准	方法
桑叶多糖  %	≥5.0	白鸿2011版保健食品功效与成分检测方法-葡聚糖的分光光度测定法
水分   %	≤5.0	GB/T 5009.3
炽灼残渣  %	≤5.0	GB/T 5009.4
重金属（以铅（Pb）计） mg/kg	＜20	GB/T 5009.12
菌落总数  cfu/g	＜1000	GB/T 4789.2
霉菌及酵母菌 cfu/g	＜100	GB/T 4789.15
大肠埃希菌	不得检出	GB/T 4789.38
沙门菌	不得检出	GB/T 4789.4
葡萄球菌	不得检出	GB/T 4789.10

 

　　桑叶黄酮

 

桑叶黄酮 规格单
项目	标准	方法
桑叶黄酮 %	≥5.0	白鸿2011版保健食品功效与成分检测方法-总黄酮的分光光度测定法
水分 %	≤5.0	GB/T 5009.3
炽灼残渣 %	≤5.0	GB/T 5009.4
重金属（以铅（Pb）计）mg/kg	＜20	GB/T 5009.12
菌落总数 cfu/g	＜1000	GB/T 4789.2
霉菌及酵母菌 cfu/g	＜100	GB/T 4789.15
大肠埃希菌	不得检出	GB/T 4789.38
沙门菌	不得检出	GB/T 4789.4
葡萄球菌	不得检出	GB/T 4789.10

 

　　桑叶DNJ（脱氧野尻霉素）

 

DNJ脱氧野尻霉素 规格单
项目	标准	方法
DNJ(脱氧野尻霉素） %	≥1.0	白鸿2011版保健食品功效与成分检测方法-DNJ的高效液相色谱法
水分 %	≤5.0	GB/T 5009.3
炽灼残渣 %	≤5.0	GB/T 5009.4
重金属（以铅（Pb）计）mg/kg	＜20	GB/T 5009.12
菌落总数 cfu/g	＜1000	GB/T 4789.2
霉菌及酵母菌 cfu/g	＜100	GB/T 4789.15
大肠埃希菌	不得检出	GB/T 4789.38
沙门菌	不得检出	GB/T 4789.4
葡萄球菌	不得检出	GB/T 4789.10

 

　　【桑叶多糖检测方法】：保健食品中水溶性粗多糖的测定方法

　　1.范围

　　本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。

　　本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。

　　本方法最低检出浓度：5.0mg/L。

　　本方法最佳线性范围：5.0ug/mL—200ug/mL。

　　2.原理

　　食品中分子量>10000的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。

　　原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

　　3．试剂

　　本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

　　3.1 乙醇溶液(80%):20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。

　　3.2 氢氧化钠溶液(100g/L):称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。

　　3.3 铜试剂储备液:称取3.0gCuSO4.5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀备用。

　　3.4 铜试剂溶液：取铜储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。

　　3.5 洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液，10mL氢氧化钠溶液，混匀，临用新配。

　　3.6 硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。

　　3.7 苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存一月。

　　3.8 葡萄糖标准储备溶液:精密称在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖标准0.5000g，加溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。

　　3.9 葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准储备液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。

　　4．仪器

　　4.1 分光光度计

　　4.2 离心机

　　4.3 旋转混匀器

　　5.分析步骤

　　5.1 标准曲线制备:

　　精密吸取葡萄糖标准使用液0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL(相当于葡萄糖，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10mg)分别置于25mL比色管中，准确补充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL，于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min.，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　5.2 试样处理

　　5.2.1 试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于水浴上加热2h，冷却至室温后补加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖。

　　5.2.2 沉淀粗多糖:精密取5.2.1滤液5.0mL或液体试样5.0mL，置于50mL离心管中，加入无水乙醇20mL，混匀5min.，以3000rpm离心5min.，弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复3—4次操作。残渣用水溶解并定容至5.0mL，混匀，供沉淀葡聚糖。

　　5.2.3 沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL离心管中，加入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL，铜试剂溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min.，冷却后以3000rpm离心5min.，弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心，弃去上清液，反复3次操作，残渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并转移至50mL容量中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为试样测定液。

　　5.3 试样测定:精密吸取试样测定液2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0 mL，在旋转混匀器上混匀后，小心加入浓硫酸10.0mL后于旋转混匀器上小心混匀，置沸水浴中煮沸2min.，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处，以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量，计算试样中水溶性粗多糖含量。同时作试样空白实验。

　　5．4 分析结果表述

　　试样中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）计算。

　　5．4．1 计算

　　

　　式中:x—试样中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖计)，mg/g;

　　m1---试样测定液中葡萄糖的质量，mg;

　　m2---试样空白液中葡萄糖质量，mg;

　　m---试样质量，g;

　　V1---试样提取液总体积，mL;

　　V2---沉淀粗多糖所用试样提取液体积，mL;

　　V3---粗多糖溶液体积，mL;

　　V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积，mL;

　　V5--试样测定液总体积，mL;

　　V6---测定用试样测定溶液体积，mL。

　　5．4．2结果表示

　　计算结果保留两位有效数字。

　　6.技术参数

　　回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为87.8～110.8%。

　　精密度：同一试样10次测定结果的RSD为5.8%。

　　干扰因素：测定过程中避免碳水化合物的玷污干扰。

　　【桑叶黄酮检测方法】：桑叶黄酮保健食品标准

　　C1总黄酮含量测定

　　C1.1试剂

　　C1.1.1聚酰胺粉

　　C1.1.2芦丁标准溶液：称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100ml，即得50ug/ml

　　C1.1.3乙醇：分析醇

　　C1.1.4甲醇：分析醇

　　C1.1.5分析步骤

　　C1.2样品处理：称取一定量的样品，加乙醇定容至25ml，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0ml，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层吸柱。先用20ml苯洗，苯液弃取，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25ml，此液于波长360nm测定吸收值，同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算样品中总黄酮含量。

　　C1.3芦丁标准曲线

　　吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。求回归方程，计算样品中总黄酮含量。

　　C1.4计算和结果表示：

　　X=A×V2/V1/M/1000

　　式中：

　　X-样品中总黄酮含量，mg/100g

　　B-由标准曲线算得被测液中黄酮量，ug

　　M-样品质量，g；

　　V1-测定用样品体积，ml

　　V2-样品定容总体积，ml

　　【桑叶DNJ检测方法】：DNJ(脱氧野尻霉素）保健食品标准

　　含量测定：1-DNJ>1%-30%（HPLC-ELSD法）

　　色谱条件:

　　色谱柱：SUPELCOSIL LC-NH2 5µ，25 cm×4.6 mmID；

　　流动相：乙腈-水(80:20)；

　　流速：0．8mL·min-1；柱温：40℃；ELSD

　　气化室温度100℃；

　　氮气流速：2.5 SLPM。

　　对照品溶液的制备：

　　分别精密称取对照品1-脱氧野尻霉素11.40 mg，用甲醇溶解并定容至10mL容量瓶，摇匀，即得。

　　供试品溶液的制备:

　　取本品0.15 g，精密称取，置于具滤纸的漏斗上，用乙醇约20ml分数次洗涤，滤纸及残渣挥干乙醇，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　测定法:

　　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，测定，即得。